可通過以下方法降低轉(zhuǎn)基因探針法PCR試劑盒存在的誤差
點(diǎn)擊次數(shù)：465 更新時(shí)間：2023-01-05
轉(zhuǎn)基因探針法PCR試劑盒是使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行的核酸同步擴(kuò)增和檢測/定量的方法，是一種可支持研究應(yīng)用的多用途強(qiáng)大工具，查找經(jīng)過優(yōu)化的實(shí)時(shí)預(yù)混液、試劑和試劑盒，推動(dòng)您的實(shí)驗(yàn)進(jìn)展。適用于常規(guī)的反應(yīng)和一些結(jié)構(gòu)復(fù)雜的模板如GC含量高、有二級(jí)結(jié)構(gòu)等的擴(kuò)增，由于多種增強(qiáng)劑和穩(wěn)定劑的發(fā)現(xiàn)，穩(wěn)定預(yù)配好的混合液不僅簡化了操作程序、減少了污染、降低勞動(dòng)強(qiáng)度和取樣誤差。
那么如何降低轉(zhuǎn)基因探針法PCR試劑盒可能存在的誤差呢？
1、注意試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。
2、仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。
3、檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。
4、使用校對(duì)過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測尤為重要。
5、洗滌*，如若洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
6、評(píng)估試劑的實(shí)用性，試劑的穩(wěn)定與否，對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進(jìn)行陰、陽對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)，判定試劑符合要求后方可使用。
7、嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)時(shí)間過長，酶失活；反應(yīng)時(shí)間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
8、嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間，顯色時(shí)間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報(bào)陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
